型培养物保藏中心,并维持在补

充有胎牛血清(;ibco)和青霉素链霉素.

充有胎牛血清(;ibco)和青霉素链霉素(ibco)的培养基(ifeechnologies)中。将细胞在℃、的加湿培养箱中培养。对于蛋白质印迹分析实验,细胞进行血清饥饿小时。细胞的维持方式类似,但使用的是ulbecco改良agle培养基(;ifeechnologies)。细胞被确认为、、和野生型通过扩增,然后对产物进行anger测序。细胞系已通过基因分型(;ffymetrix)进行验证,并定期检测支原体污染(ycollert;onza)。

流式细胞仪分析用含有空载体、和的逆转录病毒

转导小鼠成纤维细胞。细胞用含有空载体或–的逆转录病毒转导。将转导细胞,在荧光激活细胞分选缓冲液(、)中洗涤,并在室温下在多聚甲醛中固定分钟。为了进行透化,将细胞在皂苷缓冲液(、皂苷和)中洗涤两次,并使用抗人(;ioegend)对进行细胞内染色。使用抗和抗抗体(;ellignalingechnology)对和进行阿尔及利亚电话号码表细胞内染色。使用山羊抗兔lexaluorifeechnologies检测或的结合。在使用抗人和抗抗体(;&ystems)透化之前进行细胞外染色。使用驴抗山羊lexaluorifeechnologies检测部分的结合。随后,蛋白质印迹分析使用标

准程序进行免疫印迹以下抗体来自

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、总(目录号#)、p(目录号)编号#)、总(目录号#)和p 美国在线电子邮件列表 (目录号#)。抗人获自bcam(目录号#ab),抗多克隆β获自&ystems(目录号)。肌动蛋白辣根过氧化物酶抗体购自antaruziotechnology(目录号#sc)。将抗体用/稀释并在°下孵育过夜。使用增强化学发光试剂ealthcare,用缀合的抗小鼠、抗山羊或抗兔抗体illipore检测蛋白质。集落形成测定在一层底部琼脂上,细胞以低密度悬浮于含有的顶部琼脂中,并生长天。随后,拍摄照片并使用canalyzeremnaec进行系统分析。细胞在标准条件下在含和青霉素链霉素的中培养。p逆转录病毒载体插入通

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