和 有关样品制备的更多详

细信息,请参见扩展实验程序。制备和质量控制我们使用了最近描述的标准roadnstitute协议(伯杰等人,查普曼等人,斯特兰斯基等人,)。使用icoreends定量试剂测量肿瘤和正常浓度。测序所需的最低浓度为ng/μl。如果浓度,则需要乙醇沉淀并重新悬浮以增加浓度。凝胶电泳证实了高分子量>kb。所有肿瘤和正常样本(天然和产品)的身份均通过个 常见(equenom,圣地亚哥,加利福尼亚州) 的质谱指纹基因分型确认,并与序列数据进行比较。为了秘鲁电话号码表进行验证实验,我们使用基于hi的全基因组扩增(、genepli试剂盒)准备了每个样品的储备库。单核苷酸多态性芯片根据制造商的方案,使用ffymetrix全基因组人类阵列ffymetrix,nc处理来自肿瘤和配对正常样本的天然基因组。用sp和ty酶ewnglandiolabs消化,使用连接酶ewnglandiolabs连接到相应的ffymetrix接头,扩增lontech,使用磁珠gencourt纯化,标记、片段化并与数组。 杂交后,洗涤阵列并用链霉亲和素藻 红蛋白nvitrogen染色。阵列制备和扫描在布罗德研究所的实 美国在线电子邮件列表 验室进行。使用ffymetrixowerools进行数据预处理。如前所述进行质量控制、数据完整性、分割和拷贝数分析(伯杰等人,查普曼等人,斯特兰斯基等人,)。通过对标准化分段数据应用以下阈值来定义每个样本中的拷贝数改变区域。log比率>的片段被指定为“增益”区域,log比率的片段被指定为“损失”区域。log比率>的片段被指定为“高水平增益”区域,而log比率的片段被指定为“纯合损失”区域。长度小于b的拷贝数改变的片段另外被设计为“局部”损失或增益的区域,否则它们被称为“广泛的”例如,在表中。全外显子

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