未克隆的聚合酶链反应片段进

 从样本中提取,扩增所有个外显子,并对行.

 从样本中提取,扩增所有个外显子,并对行测序,并在正义和反义方向上分析是否存在杂合突变。所有序列变异均通过多次独立的扩增得到证实。引物序列和扩增条件在补充附录中进行了解释。还在乳腺(个样本)、结肠(个样本)、肾脏(个样本)、胰腺(个样本)和大脑(个样本)的原发性肿瘤中寻找外显子和的突变,以及一组代表不同组织学类型的种癌

症衍生细胞系(列于补充附录) 突变构建

体的功能分析通过定点诱变将和delins突变引入全长编码序列,并插入巨细胞病毒启动子驱动的表达构建体(p,pstate)中。用μg表达构建体转染os细胞(ipofectamine,nvitrogen),小时后以×英国电话号码清单的浓度重新铺板孔板(ostar)中每孔细胞数,含有不含胎牛血清的ulbecco基本必需培养基。血清饥饿小时后,用每毫升ngigma刺激细胞。为了确定突变受体是否被吉非替尼抑制,在每毫升添加ng

之前三小时将药物添加到培养基中 细胞暴

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露于分钟。在μlaemmli裂解缓冲液中制备细 美国在线电子邮件列表 胞裂解物,然后在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳上解析蛋白质,转移到膜上,并使用增强化学发光试剂mersham进行蛋白质印迹分析。使用针对位磷酸酪氨酸的抗体测量的自磷酸化,结果对吉非替尼有反应的患者的临床特征自年起,麻省总医院就开始使用吉非替尼作为单药治疗晚期化疗难治性非小细胞肺癌患者。总共有名患者接受了治疗,在年月获得美国食品和药物管理局批准之前,作为同情使用扩大准入计划的一部分,以及随后使用商业供应。在此期间,名患者被医生鉴定为对该药物产生了临床上显着的反

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