进行靶向重测序以进行验证。具有luidigm兼容尾部的引物被设计为位于感兴趣位点的侧翼并产生bp/bp的扩增子。每个样品–ng与含有llumina接头序列、样品特异性分子条形码和与引物尾部互补的序列的寡核苷酸混合。该混合物用作在luidigmaccessarray上扩增的每个样品的模板。该方给定样品的所有扩增子都收到相同的测序条形码。根据制造商的说明在luidigmaccessarray上进行。在luidigmaccess阵列
上的单个收集孔中回收每个样品的条形码文库
，使用icoreends定量试剂（nvitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州）进行定量，并对各个文库的浓度进行标准化。将文库加载到lluminai仪器上，并使用双短信网关塞尔维亚端bp测序读数进行测序。希等人，尤扎等人，）。所有质粒均通过测序确认。细胞培养和通过病毒转导产生细胞系通过逆转录病毒感染建立稳定表达外显子、缺失、突变体或野生型的混合细胞系和a/细胞，并按先前所述进行维持（格罗伊利希等人，江等，）。在刺激和收获之前，
将培养物进行血清饥饿小时。表皮生长因子
，iosource）用ng/ml处理分钟。不依赖贴壁 美国在线电子邮件列表 的生长测定如前所述，软琼脂测定一式三份进行（格罗伊利希等人，）。使用mage软件对软琼脂中形成的菌落数进行定量。每个测定至少重复两次并获得可比较的结果。细胞生长抑制试验将a/细胞（,个细胞）接种于孔平底板（orning）的μl培养基中，并在小时后按照所示浓度添加在μl细胞培养基中制备的埃罗替尼。与ellountingit溶液（ojindo，熊本，日本）孵育小时后，通过光谱仪测量波长nm处的
